Phi29DNAPolymerase

概述
    Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力，同时具有3→5外切酶校读功能，还具有特殊的链置换和连续合成特性。
 
应用
    1.恒温protein-primed DNA扩增。
    2.利用随机引物扩增DNA。
    3.滚环复制。
    4.复制extended-region。
 
来源
    从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，使用大肠杆菌表达和纯化Phi29 DNA聚合酶。
 
活性单位定义
    在30°C条件下，30min内能使25 pmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
 
贮存条件
       50mMTris-HCl pH7.5，100mMKCl，1mMDTT，0.1mMEDTA，0.5%NP40, 0.5% Tween 20 ，50% glycerol；-20℃贮存。
 
10×反应缓冲液
        400mMTris-HCl（pH 7.5）, 500mMKCl ,100mMMgCl2 , 50mM(NH4)₂SO₄，40mMDTT。反应时需要加入dNTP(不随酶提供)。
 
热失活
        65°C20min。
 
纯度
        考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90％，并无内切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。
 
应用
        滚环复制方法：
        第一步：样品（菌液或质粒）准备：

        1.菌液准备：挑取琼脂板上的菌落（尽量避免挑取到培养基）移至10 μl 的ddH₂O中，混匀。
        2.质粒准备：扩增已纯化的环状质粒，稀释至10 μg/ml。

        第二步：混合样品和其他反应物：