质粒小量抽提试剂盒

产品介绍
     华因康质粒小量抽提试剂盒采用新型的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物达到快速纯化质粒DNA的目的。适合于从5ml细菌培养物中提取多至20-30μg高纯的质粒DNA，用于转化、DNA测序、PCR、体外转录与翻译、限制性内切酶消化等后续实验。使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。每个DNA纯化柱可结合的DNA最大量约为20μg。
 

试剂盒组成

组成名称	KT4006-01	KT4006-02
溶液SI(悬浮液)	8ml	15ml
溶液SII(裂解液)	15ml	25ml
溶液SIII(沉淀液)	20ml	40ml
DNA纯化柱与收集管	50	100
2.0ml菌液收集管	50	100
洗涤液WB	15ml	30ml
收集液EB	8ml	15ml
RNaseA(10mg/ml)	160ul	300ul
说明书	1份	1份

 











使用范围与技术指标
    1.适用于从菌液中提取各类高、中、低拷贝量的质粒。
    2.本试剂盒可纯化长度达15kb的质粒。
    3.过夜培养的菌液（一般OD600>1.5），高拷贝量质粒提取能力每毫升菌液可达4-6μg，如pUC18等；中低拷贝量质粒每毫升菌液1-3μg，如pET系列载体。

Lane M: 1Kb DNA Marker
        Lane 1: 试剂盒提取2.7kb质粒

保存条件
    1.未开封室温保存，一年有效。
     2.溶液SII，溶液SIII使用后密封保存，尽量避免长时间开口暴露空气中。
     3.溶液SI加入RNase A(10 mg/ml)后于4℃保存。

注意事项
     1.洗涤液WB使用前加入4倍体积无水乙醇。
     2.RNase A(10 mg/ml)使用前全部加入到溶液SI中，并置于4℃保存。
     3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。溶液SII、溶液SIII、洗涤液WB避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛，要用大量清水或生理盐水冲洗。
     4.温度较低时溶液SII、溶液SIII可能出现浑浊，应置于50℃水浴锅温育直至溶解。

使用说明
     第一次使用时，将试剂盒携带的RNaseA全部加入到溶液SI中，混合均匀，4°C保存。
     1.取2ml菌液，8,000rpm离心1min，去除上清，收集菌体，倒尽或吸干培养基。（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，一般可多至6-10ml菌液）。
     2.向留有菌体沉淀的离心管中加入150μl溶液SI(请先检查是否已加入RNaseA），吸打或振荡至彻底悬浮菌体。（如果菌块未彻底混匀，会影响质粒的得率和质量）。
     3.向离心管中加入250μl溶液SⅡ，温和地颠倒离心管6-8次使菌体充分裂解。（混匀一定要温和，与之前步骤相比，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min）。
     4.向离心管中加入400μl溶液SⅢ，立即颠倒离心管6-8次，充分混匀，此时会出现白色沉淀。
     5.12,000rpm离心5-10min。（如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清）小心地将上清移入吸附柱中，室温放置2分钟，8,000rpm离心1min，倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。（过柱后液体可进行第2次过柱，增加回收效率）。
     6.向吸附柱中加入700μl洗涤液WB(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，8,000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
     7.向吸附柱中加入500μl洗涤液WB，8,000rpm离心1min，弃废液。
     8.12,000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温2-3分钟，目的是去除吸附柱中残余的洗涤液WB。
     9.将吸附柱放入一个干净的1.5ml收集管中，向吸附膜中央加入100-150μl EB(将EB预热至60℃可以进一步提高得率），室温放置2min，12,000rpm离心1min。(为了增加质粒的回收效率，可将收集液 EB分两次洗脱，每次50μl加入吸附柱中，效率明显有提升)。