TaqDNAPolymerase

概述
    TaqDNA Polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶，来源于嗜热细菌Thermus aquaticus。该酶具有5′-3′DNA聚合酶活性，还具有较低的5′-3′ 核酸外切酶活性，没有3′-5′的外切酶活性，在PCR产物的3′ 末端会加一个“A”，可用于TA克隆。
 
应用 
   1.常规PCR扩增反应，可扩增长达6kb的DN**段，通常适合扩增长度3kb以下的片段。   
   2.平端PCR产物3′ 末端加“A”。    
   3.DNA测序。     
   4.DNA3′ 末端标记。

来源
   来源于Thermus aquaticusYT1的TaqDNA Polymerase基因的重组E. coli菌株。
 
活性单位定义
    1单位（U）TaqDNA Polymerase活力定义为在72℃条件下，30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，催化掺入10nmol 脱氧核苷酸成为酸不溶性物质所需的酶量。
 
贮存条件
    20 mMTris-HCl (pH8.0)，100 mMKCl，0.1 mMEDTA，0.1 % NP-40 (v/v)，0.1 % Tween-20 (v/v)，1 mMDTT，50 %甘油（v/v），-20°C贮存。

10×TaqBuffer（with Mg²⁺）
     100 mM Tris-HCl (PH 8.8)
     500 mMKCl
     15 mMMgCl₂
     1% Triton X-100

常规PCR反应条件
     一.室温融化反应所需溶液后混匀并短暂离心至管底，连同TaqDNA聚合酶一起置于冰上。
     二.按如下PCR反应体系（50μl）混合各溶液：

 

Template DNA	×μl
ForwardPrimer（10 μM）	1 μl
ReversePrimer（10 μM）	1 μl
dNTP Mixture（10 mMeach）	1 μl
10×Taq Buffer（with Mg2+）	5 μl
TaqDNA Polymerase（5U/μl）	0.25 μl
灭菌ddH2O	up to 50 μl

                       注①：50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

人类基因组DNA	50~500ng
大肠杆菌基因组DNA	5~50ng
λDNA	0.5~10ng
质粒DNA	0.1~5ng

                        ②：可以使用不含Mg²⁺的反应buffer,并根据需要自行添加MgCl₂达到Mg²⁺ 的最适反应浓度。
      三.轻轻混匀反应液并短暂离心至管底，如果PCR仪没有热盖可加入一半体积的矿物油。 
      四.将PCR管放入PCR仪中，设置并运行PCR反应条件如下：

步骤	温度	时间	循环次数
预变性	94℃	3~5min	1
变性	94℃	30s	25~35
退火	Tm-5℃	30s
延伸	72℃	1min/kb
最后延伸	72℃	5~15min	1

           注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异，在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计最佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。
 
质量控制