营养琼脂平板(NutrientAgarPlate)

上海楚柏Truelab是广东环凯微生物产品和水质检测产品的上海区域代理商。024089   营养琼脂平板(Nutrient Agar Plate)用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定（GB/T4789.28－2003 中4.7和GB15979－2002, 参考GB15979－2002、《中华人民共和国药典》2005年版和GB15981-1995）。
 
原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；氯化钠能维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

配方（每升）：

蛋白胨	10g
牛肉膏粉	3g
氯化钠	5g
琼脂	15g

最终pH 7.3±0.2 

使用方法：
1、(食品)以无菌操作称取检样25克（或25mL），放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠），充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。
2、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
3、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。
4、观察结果。
5、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
6、菌落计数的报告：选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计
A：稀释度的选择：
应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。
若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，则应报告其平均数；若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4)。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5)。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6)。
若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7)。
 
菌落数的报告：
菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。

稀释度选择及菌落数报告方式

例次	稀释液及菌落数			两稀释液之比	菌落总数个/g或mL	报告方式个/g或mL
	10-1	10-2	10-3
1	多不可计	164	20	——	16 400	16 000或1.6×104
2	多不可计	295	46	1.6	37 750	3 8000或3.8×104
3	多不可计	271	602.2	——	27 100	27 000或2.7×104
4	多不可计	多不可计	313	——	31 300	31 0000或3.1×105
5	27	11	5	——	270	270或2.7×102
6	0	0	0	——	＜1×10	＜10
7	多不可计	305	12	——	30 500	31 000或3.1×104

 
质量控制：本品接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下：

菌名	菌号	生长状况	菌落特征
大肠埃希氏菌	ATCC25922	良好	白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。
金黄色葡萄球菌	ATCC6538	良好	黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。

贮存：贮存于4-8℃。贮存期三个月。
规格：20个/盒

参考文献：
1.GB/T4789.2－2003 中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验 菌落总数测定
2.GB/T4789.28－2003中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物检验 染色法，培养基和试剂
3.GB15979－2002 中华人民共和国国家标准 一次性使用卫生用品卫生标准